Survivin shRNA-APC双基因共表达稳转株对HT-29结肠癌细胞裸鼠皮下移植瘤组织新生血管形成的影响

摘要：目的 探讨Survivin shRNA-APC双基因共表达稳转株对HT-29结肠癌细胞裸鼠皮下移植瘤组织细胞中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、环氧合酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)表达情况及新生血管形成的影响.方法 采用随机数字表法将40只裸鼠分成5组,分别为阴性对照组、空载组、Survivin shRNA组、APC组、Survivin shRNA-APC双基因组.阴性对照组:接种HT-29细胞,空载组:接种空载稳转株,Survivin shRNA组:Survivin shRNA稳转株,APC组:接种APC稳转株,Survivin shRNA-APC双基因组:接种Survivin shRNA-APC双基因组共表达稳转株.将各组稳转株及HT-29结肠癌细胞进行培养,磷酸盐缓冲液(phosphate buffer saline,PBS)重悬使细胞密度达到2×107/ml,每只裸鼠右前腋下分别接种相对应的细胞悬液,构建裸鼠皮下移植瘤模型.待接种6周后统一处死所有裸鼠,剥离移植瘤,分别应用Real time PCR及免疫组化方法检测各组移植瘤组织细胞中VEGF、COX-2mRNA及蛋白表达水平,选取CD34抗体标记血管内皮细胞,应用免疫组化方法测定移植瘤组织微血管密度(MVD).结果 每只裸鼠皮下均形成肿瘤.VEGF及COX-2mRNA表达相对含量SurvivinshRNA组[(50.84±3.64)％、(50.11±3.91)％]、APC组[(74.28±6.87)％、(72.39±6.55)％]、Survivin shRNA-APC双基因组[(21.78±4.00)％、(20.74±5.12)％]较空载组[(100.00±0.00)％、(100.00±0.00)％]、阴性对照组[(98.22±0.38)％、(97.61±0.77)％]明显降低,差异均有统计学意义(P均＜0.05);且Survivin shRNA-APC双基因组中VEGF、COX-2 mRNA表达相对含量较Survivin shRNA组、APC组亦明显降低,差异有统计学意义(P均＜0.05).VEGF、COX-2蛋白表达量Survivin shRNA组(5.15±1.02、5.26±0.91)、APC组(4.96土1.12、4.93± 1.18)、Survivin shRNA-APC双基因组(1.86±0.84,1.80±0.81)较阴性对照组(8.95±0.55、8.77±0.60)和空载组(9.17±0.49、9.01±0.80)明显降低,差异均有统计学意义(P均＜0.05);且Survivin shRNA-APC双基因组中VEGF、COX-2蛋白表达量较Survivin shRNA组、APC组亦明显降低,差异均有统计学意义(P均＜0.05).Survivin shRNA组(12.14±3.45)、APC组(11.39±2.94)、Survivin shRNA-APC双基因组(3.96±2.20) MVD值较阴性对照组(25.09±5.59)和空载组(27.87±7.36)明显降低,差异均有统计学意义(P均＜0.05);Survivin shRNA-APC双基因组MVD值较Survivin shRNA组、APC组亦显著降低,差异均有统计学意义(P均＜0.05).结论 Survivin shRNA-APC双基因共表达稳转株能明显下调移植瘤组织细胞中VEGF、COX-2 mRNA及蛋白表达水平,进而有效抑制移植瘤组织新生血管形成,并且其抑制效果较Survivin shRNA及APC单基因稳转株更为显著.